1、在VB6中新建立一个工程
2、在Form1的Load事件中加入下面这段代码：

'本程序只能运行一次的判断
If App.PrevInstance = True Then '判断程序是否已运行，如果为真
Title = App.Title '记录下本程序的标题
Call MsgBox(App.Title + "(版本 " & App.Major & "." & App.Minor & "." & App.Revision & ")已运行！", vbInformation) '产生一个提示对话框
App.Title = "第二次执行" '改变本程序标题,这样才不会激活自己
AppActivate Title '激活先前已执行的程序
End '结束本次执行之实例,保证仅运行一个程序
End If
3、将程序编译后，将可执行程序运行两次你就会发现这个程序只能允许启动一个实例。
正文
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